AV播放网站|久久精品免费视频6|潘甜甜在线观看|中日韩欧美电影免费看|男人舔女人逼

熱線電話:010-56545250
  技術(shù)服務(wù)
服務(wù)專題
熒光定量PCR專題
microRNA研究攻略
植物RNAi技術(shù)及服務(wù)
雙熒光素酶檢測【啟動(dòng)子活性分析】
雙熒光素酶檢測【miRNA對(duì)靶基因調(diào)控研究】
 
您當(dāng)前的位置:首頁 > 服務(wù)專題 > 植物RNAi技術(shù)及服務(wù)
植物RNAi技術(shù)及服務(wù)
   RNAi技術(shù)是研究基因功能的重要工具。其原理是對(duì)某個(gè)已知基因,設(shè)計(jì)誘導(dǎo)其沉默的dsRNA,通過合適手段導(dǎo)入細(xì)胞或機(jī)體使產(chǎn)生干涉效應(yīng)的信號(hào)分子siRNA,導(dǎo)致基因表達(dá)水平下降或完全沉默。通過基因表型變化,鑒定該基因功能。
  1998年,F(xiàn)ire等[1]發(fā)現(xiàn),過去利用正反義RNA阻斷基因表達(dá)都是因體外制備的單鏈RNA中污染極少量雙鏈RNA(dsRNA)所引起的,并發(fā)現(xiàn)在線蟲中導(dǎo)入dsRNA,mRNA明顯減少,推論存在某種機(jī)制特異地破壞降解內(nèi)源mRNA,導(dǎo)致某個(gè)基因沉默,即轉(zhuǎn)錄后基因沉默(PTGS)。在此情況下,啟動(dòng)子是活躍的但不能正常積累mRNA。這種現(xiàn)象被稱為RNA干涉(RNAi)。研究表明RNAi現(xiàn)象廣泛存在大多數(shù)真核生物中,起到自行監(jiān)控細(xì)胞中異常的mRNA、封閉該基因表達(dá)、抵御病毒感染及阻斷轉(zhuǎn)座子的作用。
  最初在植物中研究RNAi的實(shí)驗(yàn)是使水稻中報(bào)告基因GUS沉默,來比較正義鏈、反義鏈及dsRNA誘導(dǎo)RNAi效率的高低。近年來利用RNAi技術(shù)在水稻、擬南芥、蕓薹屬、油菜、煙草及棉花上,已經(jīng)進(jìn)行了一些基因功能驗(yàn)證的相關(guān)研究[3]。
  研究表明,在植物體中,信號(hào)分子siRNA可通過植物的維管系統(tǒng)運(yùn)輸。將目標(biāo)基因特異性序列以正向和反方分別插入標(biāo)記基因或內(nèi)含子的5’端和3’端,再在一端連接一個(gè)啟動(dòng)子,用轉(zhuǎn)基因技術(shù)將反式重復(fù)的外源基因?qū)肷矬w,誘導(dǎo)表達(dá)發(fā)夾結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物RNA(iphRNA),能產(chǎn)生穩(wěn)定遺傳的RNAi現(xiàn)象[5],其誘導(dǎo)目的基因沉默效率高,適用性廣,應(yīng)用潛力大。

dsRNA或iphRNA能通過以下主要兩種方法到植物:

農(nóng)桿菌介導(dǎo)法。將帶有能轉(zhuǎn)錄成ihpRNA的反式重復(fù)的外源基因的T-DNA質(zhì)粒,通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)整合到植物基因組上。
病毒誘導(dǎo)基因沉默(VIGS)。目標(biāo)序列整合入病毒基因序列,通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化ihpRNA表達(dá)。

pSGRNAi Vector---植物RNAi載體****

信諾金達(dá)已經(jīng)驗(yàn)證的植物有:擬南芥、水稻、黃花菜、紅苕,玉米等。
根據(jù)目的基因來源,可選擇構(gòu)建35S或Ubi啟動(dòng)子的RNAi載體。

VIGS系統(tǒng)

病毒誘導(dǎo)的基因沉默(virus induced gene silencing,VIGS)是指攜帶目標(biāo)基因片段的病毒侵染植物后,可誘導(dǎo)植物內(nèi)源基因沉默、引起表型變化,進(jìn)而根據(jù)表型變異研究目標(biāo)基因的功能。VIGS是根據(jù)植物對(duì)RNA病毒防御機(jī)制發(fā)展起來的一種技術(shù),其內(nèi)在的分子基礎(chǔ)可能是轉(zhuǎn)錄后基因沉默(post-transcript gene silence)。因此,VIGS一經(jīng)建立,即被視為研究植物基因功能的強(qiáng)有力工具,得到了深入的研究和廣泛應(yīng)用,已用于煙草、番茄等植物的抗病反應(yīng)、生長發(fā)育以及代謝調(diào)控的功能基因研究。

相應(yīng)的pTRV1和pTRV2載體配套使用,用于植物RNAi。

植物RNAi載體構(gòu)建的服務(wù)要求

目的基因序列或者登錄號(hào);
需要的啟動(dòng)子和篩選基因。

植物RNAi載體構(gòu)建的基本流程

設(shè)計(jì)引物,
構(gòu)建siRNA莖環(huán)結(jié)構(gòu);
根據(jù)要求,構(gòu)建載體;
測序驗(yàn)證。

植物RNAi載體構(gòu)建的實(shí)驗(yàn)報(bào)告內(nèi)容

RNAi質(zhì)粒及甘油菌株,測序報(bào)告和詳細(xì)實(shí)驗(yàn)報(bào)告。

發(fā)表文獻(xiàn)精選:

發(fā)送到info@sinogenesci.com或電話咨詢信諾金達(dá)技術(shù)部。

咨詢電話:010-56545250  QQ: 78001304  微信:xinnuojinda


站點(diǎn)地圖 | 收藏本站 | 人才招聘 | 關(guān)于我們 | 聯(lián)系我們
地址:北京昌平區(qū)中關(guān)村生命科學(xué)園北清創(chuàng)意園1-222 電話:010-56545250 郵箱:info@sinogenesci.com 技術(shù)支持QQ:78001304 微信:xinnuojinda
© 2010-2024 北京信諾金達(dá)生物科技有限公司 版權(quán)所有 京ICP備10216372號(hào) 京公網(wǎng)安備11010802014978