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植物蛋白互作驗證 BiFC/LCI
雙分子熒光互補 (Bimolecular Fluorescence Complementation, BiFC)是一項可直觀、快速判斷目標(biāo)蛋白在活細(xì)胞中的定位和相互作用的新技術(shù)。將蛋白在某些特定的位點切開，形成不發(fā)熒光的N和C端2個多肽，稱為N片段(N-fragment)和C片段(C-fragment)。這2個片段在細(xì)胞內(nèi)共表達(dá)或體外混合時，不能自發(fā)地組裝成完整的熒光蛋白，在該熒光蛋白的激發(fā)光激發(fā)時不能產(chǎn)生熒光。但是，當(dāng)這2個熒光蛋白的片段分別連接到1組有相互作用的目標(biāo)蛋白上，如果目標(biāo)蛋白質(zhì)之間有相互作用，則在激發(fā)光的激發(fā)下，產(chǎn)生該熒光蛋白的熒光。反之，若蛋白質(zhì)之間沒有相互作用，則不能被激發(fā)產(chǎn)生熒光。
技術(shù)原理
螢火蟲熒光素酶片段互補圖像技術(shù)（LCI）是近年來形成的研究蛋白互作的新技術(shù)，把2個目標(biāo)蛋白分別連接于螢火蟲熒光素酶的C端和N端。如果2個蛋白互作，N段和C端接近形成有活性的熒光素酶。基于煙草瞬時表達(dá)的LCI技術(shù)將LCI技術(shù)與煙草瞬時表達(dá)相結(jié)合，在研究植物蛋白的相互作用中，可以實現(xiàn)活體細(xì)胞內(nèi)實時、定量分析；不受植物自發(fā)熒光的干擾；而且操作簡單，不需要裂解細(xì)胞提取蛋白質(zhì)，可以很好的反映植物生理條件下蛋白的互作狀態(tài)。
實例圖片
服務(wù)要求
1.基因序列或構(gòu)建好的質(zhì)粒。
2.提供新鮮或保存完好的植物組織或RNA。
服務(wù)基本流程
1.基因克隆，BiFC/LCI載體構(gòu)建；
2.轉(zhuǎn)煙草；
3.觀察；
4.實驗報告。
交付數(shù)據(jù)及材料
1.完整的實驗報告，包括原始數(shù)據(jù)、詳細(xì)的實驗步驟及整理結(jié)果；
2.構(gòu)建好的質(zhì)粒及農(nóng)桿菌菌株。
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