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GST pull-down
GST pull-down是驗(yàn)證兩個(gè)蛋白體外結(jié)合的方法之一。原理是：將靶蛋白與GST融合表達(dá)，并將蛋白固化在谷胱甘肽(GSH)親和樹脂上，作為與目的蛋白親和的支撐物，充當(dāng)“誘餌蛋白”，目的蛋白溶液過柱，可從中捕獲與之相互作用的“捕獲蛋白”（目的蛋白），洗脫結(jié)合物后通過WB分析，從而證實(shí)兩種蛋白間的相互作用。
"誘餌蛋白"和"捕獲蛋白"均可通過細(xì)胞裂解物、純化的蛋白、表達(dá)系統(tǒng)以及體外轉(zhuǎn)錄翻譯系統(tǒng)等方法獲得。此方法簡單易行，操作方便。示意圖如下
服務(wù)要求
構(gòu)建表達(dá)純化靶蛋白與相關(guān)誘餌蛋白（或提供序列由信諾金達(dá)構(gòu)建），或者含有誘餌蛋白的細(xì)胞裂解上清或者其它（或有信諾金達(dá)公司表達(dá)裂解）；檢測用一抗（GST/His/Flag有信諾金達(dá)公司免費(fèi)提供）。如果提供表達(dá)蛋白樣品需-20℃凍存，冰袋運(yùn)輸。
服務(wù)基本流程
1.構(gòu)建原核表達(dá)載體；
2.誘導(dǎo)蛋白表達(dá)；
3.GST pull-down；
4.SDS-PAGE 或WB檢測；
5.整理實(shí)驗(yàn)報(bào)告。
服務(wù)報(bào)告內(nèi)容
提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告， SDS-PAGE 或WB結(jié)果。 |
