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熒光素酶報告基因系統是以熒光素（luciferin）為底物來檢測螢火蟲熒光素酶（fireflyluciferase）活性的一種報告系統。熒光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的過程中，會發出生物熒光（bioluminescence），可通過熒光測定儀設備測定luciferin氧化過程中釋放的生物熒光，常應用于啟動子轉錄活性調控及miRNA靶基因驗證等方向研究。
啟動子與轉錄因子相互作用檢測
轉錄因子是一種具有特殊結構、行使調控基因表達功能的蛋白質分子，也稱為反式作用因子。某些轉錄因子僅與其靶啟動子中的特異順序結合，這些特異性的序列被稱為順式因子。轉錄因子的DNA結合域和順式因子實現相互結合，從而對基因的表達起抑制或增強的作用。熒光素酶報告基因實驗是檢測這類轉錄因子和其靶啟動子中的特異順序結合的重要手段。
miRNA與3’UTR相互作用檢測
miRNAs 與靶基因的3' UTR區域特異結合后調節靶基因的表達。當3' UTR靶標序列融合在一個熒光素酶報告基因下游并在體外表達時，miRNA通過與下游3' UTR特異結合從而調節熒光素酶的表達。通過分析熒光素酶的活性，間接了解miRNA的靶標調控作用和特異性。
熒光素酶報告基因的檢測流程
細胞篇
1、重組質粒制備: 制備含有待檢測基因-Luc/Rluc的重組質粒；
2、細胞系選擇: 根據實驗需要選擇細胞株，通常選擇轉染效率較高的293T細胞或原代細胞等；
3、共轉染: 將帶有Luc/Rluc標記的報告基因和目的基因進行共轉染，設置不同的檢測時間點，一般為24h/48h；
4、外界干預: 轉染后，可進行物理/化學/病毒等的相應刺激；
5、細胞處理: 采用進口/國產雙熒光素酶檢測試劑盒依照protocol操作；
6、熒光檢測: 使用GENios Pro 酶標儀或具有類似檢測功能的設備進行熒光強度檢測。
煙草葉片篇
1、制備重組質粒
2、農桿菌轉化及培養：質粒轉化比例需要摸索。轉化后需過夜培養，OD600達到0.8以上即可；
3、利用無針頭注射器注射葉片，（先用針頭在葉片上扎個小孔）（注射煙草頂端以下第3-5片葉片）；
4、暗培養1d，光照培養2d;
5、取葉片進行打孔，8mm-1.5cm即可; 6、在2mL的EP管中加入預冷的小鋼珠，放入3-4片煙草葉盤并加入適量的液氮，使用儀器進行研磨破碎（45Hz，30s），加入100μL裂解液，10000-16000rpm離心2min，取上清20μL進行檢測。
7、檢測：方法同動物細胞。
實驗流程：
服務特色
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經驗豐富
生物信息學家協會協助分析啟動子區域，精準定位，多方實驗。
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資源豐富
完善的載體資源庫和啟動子資源庫，能夠方便、快捷的為客戶提供便利服務。
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一站式服務
提升客戶體驗是我們不懈的追求，立體化的上下游實驗體系讓您省心。
客戶提供
1. 啟動子轉錄活性調控：提供轉錄因子名稱及ID、靶基因名稱及ID。
2. miRNA靶基因驗證：提供miRNA名稱、物種信息、靶基因名稱及ID。
3. 實驗細胞，如無特殊要求，默認使用293T細胞。
4. 如有基因模板或構建好的轉錄因子表達載體，可以提供。
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